包含突变indehiscent等位基因的芸苔属植物
2020-01-11

包含突变indehiscent等位基因的芸苔属植物

本发明涉及其果实开裂性质经调节的作物植物。更具体地,本发明涉及改进的方法和手段,用于在植物中降低落籽或者延迟落籽直至收获之后,同时保持荚果的农艺相关可脱粒性。

6.1芸苔属植物中一个或两个突变芸苔属IND等位基因的存在和这些芸苔属植物果实开裂性质之间的关联

可选的,为了确定特定突变IND等位基因的接合性状态,可以以这样的方式设计识别野生型IND等位基因的特异性探针,所述方式使探针特异性识别在野生型IND等位基因的5’或3’侧翼区(优选的5’侧翼区)和突变区之间的连接区。该探针任选的与第二探针一起,允许突变以及野生型IND基因的诊断杂交,所述第二探针特异性识别突变IND等位基因的5’或3’侧翼区,优选的5’侧翼区和突变区之间的连接区。

优选的,扩增的片段具有在50和1000核苷酸之间的长度,例如在50和500核苷酸之间的长度,或在100和350核苷酸之间的长度。特定的引物可以具有与以下序列80至100%同一性的序列,所述序列是5’或3’侧翼区中的序列、突变区中的序列或跨越特定突变IND等位基因的3’或5’侧翼和突变区之间的连接区的序列,条件是错配仍然允许用这些引物在优化的PCR条件下特异性鉴别特定的突变IND等位基因。但是,通过实验可以容易的确定可允许的错配范围,这是本领域技术人员已知的。

SEQIDN0:1:IND-A1基因的编码DNA,编码来自欧洲油菜的野生型IND-Al蛋白质。

在一种实施方式中,氨基酸序列中的突变导致IND蛋白质较之野生型蛋白质而言生物活性显著降低或完全消失。如上文所述,基本上,导致蛋白质相对野生型蛋白质而言包含至少一处氨基酸插入、缺失和/或取代的任何突变都可能导致显著降低的生物活性或没有生物活性。但是应当理解,在蛋白质某些部分的突变更可能导致突变IND蛋白质的功能降低,例如,导致截短的蛋白质的突变,由此功能性结构域(例如DNA结合结构域(“b”)、二聚化结构域(“HLH”)和/或在转录调控中重要的氨基酸(见表1))的显著部分缺乏或被取代。

-包括进经PstI消化的噬菌体LambdaDNA(:Fermentas®)或Ikbp的DNALadder(LifeTechnologies)作为大小的标准D

-通过标准测序技术,测定选择的阳性菌落的BAC克隆中包含的IND序列(Agowa)。

-野生型DNA对照:分离自野生型芸苔属植物(包含突变IND等位基因野生型等同物,下文中被称为“IND-Xx-WT”)的叶材料的基因组DNA

SEQIDN0:2:SEQIDN0:1编码的野生型IND-Al蛋白质。

表IIND蛋白质-氨基酸(AA)区域和位置

“增加的收获产量”或“增加的种子或谷粒产量”指:较之从相似量的无突变IND等位基因的等基因(isogenic)植物收获的种子或谷粒的量而言,从多株植物(每株包含根据本发明的突变IND等位基因)收获的更大量的种子或谷粒。产量典型地以每表面单位收获的种子的体积单位表示,例如蒲式耳/英亩或Kg/ha。产量增加典型地以百分比表示,其中参照或对照植物的产量计为100%,根据本发明的植物的产量以相对对照植物的产量的%表示。在根据本发明的芸苔属植物中观察到的产量增加范围为至少101%至至少124%,预计可取得更高的产量增加。产量增加还可在104%至108%或105%至110%的范围内。

-阳性DNA对照显示出针对IND-Xx-EMSXX特异性PCR测定的预计大小的PCR片段,而没有针对IND-Xx-WT特异性PCR测定的预计大小的PCR片段

SEQIDN0:2:SEQIDN0:1编码的野生型IND-Al蛋白质。

-在I%TAE琼脂糖凝胶上上样。